高效微生物菌剂制备方法
申请日2015.05.28
公开(公告)日2015.08.12
IPC分类号C12N1/20; C02F3/34; C12R1/385; C12R1/365; C02F103/34; C12R1/01; C02F101/18; C02F101/14; C12R1/125
摘要
本发明公开了一种处理复合肥污水的高效微生物菌剂制备方法及使用方法，石材翻新13825404095利用硝化细菌、亚硝化细菌以及聚磷菌将污水中的氨氮转化为氮气，将磷转化为多磷酸盐聚积在菌体内;利用沸石、Ca(OH)2、无水亚硫酸钠将氟、氰等离子沉淀，可有效地去除这些污染物;加入葡萄糖可保持一定的硝化速率;利用三角瓶分别扩大培养，可达到各个菌种的最高生长需要，发酵罐扩大混合培养节约资源，各菌种达到要求浓度，且容易培养，经处理后的水质达到国家排放标准，本发明的微生物菌剂对复合肥污水具有非常好的去污效果，而且微生物会随着污染物的减少而逐渐消失，也不会对环境造成危害，本发明的复合微生物菌剂成本低，具有广泛的应用前景。
权利要求书
1.处理复合肥污水的高效微生物菌剂制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤A、各菌种的活化：
将硝化细菌、亚硝化细菌以及聚磷菌在固体培养基上进行活化;
步骤B、三角瓶扩大培养：
分别制备各菌种液体培养基装入250mL三角瓶中，装入液体培养基100mL，将固体培养 基上长出的菌落接种进独立三角瓶中，摇床培养，培养菌体数量达到1.0×108-6.0×108个/mL; 步骤C、发酵罐混合扩大培养：
将混合培养基3.5-4L加入发酵罐中，分别接种硝化细菌、亚硝化细菌以及聚磷菌进发酵 罐中进行培养，培养混合菌种菌体数量达到1.0×108-2.0×108个/mL;
步骤D、离心、收集沉淀、干燥得到混合菌粉：
将步骤C中得到的混合菌种培养液经过离心收集沉淀，再将沉淀干燥，得到混合菌粉; 步骤E、复合微生物菌剂的制备：
将步骤D得到的混合菌粉与沸石、Ca(OH)2、无水亚硫酸钠、葡萄糖、硫酸铜混合制 成复合微生物菌剂。
2.根据权利要求书1所述的处理复合肥污水的高效微生物菌剂制备方法，其特征在于， 步骤E中，以质量份数计，其中混合菌粉50-60份、沸石30-50份、Ca(OH)2 1-2份、无水 亚硫酸钠0.5-1份、葡萄糖0.5-1份和硫酸铜0.01-0.02份;其中沸石粉碎，过80-120目筛。
3.根据权利要求书1所述的处理复合肥污水的高效微生物菌剂制备方法，其特征在于， 所述硝化细菌为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)CGMCC No.150和氨氧化假诺卡氏 菌(Pseudonocardia ammonioxydans)CGMCC No.41877的一种或两种;
所述亚硝化细菌为氨氧化细菌(Ammonia oxidizing bacteria)CGMCC No.4287;
所述聚磷菌为产气肠杆菌(Enterbacter aerogenes)CGMCC No.16753、脱氮副球菌 (Paracoccus denitrificans)CGMCC No.15358、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtillus)CGMCC No. 17408和氧化亚铁硫酸杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)CGMCC No.15066中的一种或多 种。
4.根据权利要求书3所述的处理复合肥污水的高效微生物菌剂制备方法，其特征在于，
所述氨氧化假诺卡氏细菌液体培养基组分为：葡萄糖10g，酵母浸粉10g，蒸馏水1L;
所述氨氧化细菌液体培养基组分为：(NH4)2SO4 0.5g，NaCl 2g，FeSO4・7H2O 0.4g，K2HPO4 1g，MgSO4・7H2O 0.5g，NaCO3 5g，蒸馏水1L，调节pH值为7.2;
所述枯草芽孢杆菌液体培养基组分为：葡萄糖5g，蛋白胨5g，NaCl 3g，牛肉膏0.5g， 蒸馏水1L;
所述产气肠杆菌液体培养基组分为：(NH4)2SO4 1g，NaCl 0.1g，葡萄糖5g，Na2HPO4 2g， MgSO4・7H2O 0.5g，酵母浸粉0.5g，NaCO3 1g，蒸馏水1L，调节pH值为7.0;
上述各菌种的固体培养基为分别在其液体培养基中加入15-20g琼脂粉，并在121℃灭菌 30min。
5.根据权利要求书3所述的处理复合肥污水的高效微生物菌剂制备方法，其特征在于， 所述混合培养基组分为：葡萄糖10g，酵母浸粉10g，NaCl 1g，(NH4)2SO4 1g，K2HPO4 1g， MgSO4・7H2O 0.5g，FeSO4・7H2O 3g，NaCO3 2g，蒸馏水1L，调节pH值为7.0。
6.根据权利要求书1所述的处理复合肥污水的高效微生物菌剂制备方法，其特征在于， 步骤B中，接入三角瓶中的菌落为单菌落，摇床转速为150r/min。
7.根据权利要求书1所述的处理复合肥污水的高效微生物菌剂制备方法，其特征在于， 步骤C中，分别接种硝化细菌、亚硝化细菌以及聚磷菌量为发酵罐容积的5-10%。
8.根据权利要求书1所述的处理复合肥污水的高效微生物菌剂制备方法，其特征在于， 步骤D中，离心速率为4000r/min，干燥温度为30-40℃。
9.根据权利要求书1所述的处理复合肥污水的高效微生物菌剂制备方法，其特征在于， 步骤A、步骤B和步骤C中，培养时间为72-96h，培养温度均为28-30℃。
10.处理复合肥污水的高效微生物菌剂使用方法，其特征在于，首先，用Ca(OH)2调 节污水pH为7.0-8.0，然后，在每20m3污水中投入该复合微生物菌剂0.5-1Kg，处理污水时， 缓慢向污水中通入空气。
说明书
处理复合肥污水的高效微生物菌剂制备方法及使用方法
技术领域
本发明涉及污水处理技术领域，尤其涉及一种处理复合肥污水的高效微生物菌剂制备方法 及使用方法。
背景技术
肥料中含有两种肥料的三要素(氮、磷、钾)的二元复合、混合肥料和含有氮、磷、钾三 种元素的三元复合、混合肥料称之为复合肥，由于富含多种营养元素，因此在全国各地推广迅 速，随之而来的处理化肥厂复合肥污水成为一个问题，其中，氨氮和磷是复合肥厂的主要污染 物，进入水体可以引起水体富营养化，导致水质恶劣，氨氮主要来自合成氨、尿素车间的高浓 度氨氮废水这部分氨氮主要以无机氮存在;磷主要来自磷矿石，无机磷盐的增多可使水体中藻 类迅速生长，破坏水质，化肥厂污染物的主要来源是气化工序产生的造纸废水、脱硫工序产生 的脱硫废水和铜洗工序产生的含氨废水，复合肥的特点则是在生产中流入废水中过多的氨氮、 磷等会造成水体富营养化，同时还有氟、氰等离子流出，这些离子具有毒性。
饮用水中的氟对人体健康的影响较大，长期摄入过量的氟会使机体产生各种氟中毒症状， 常见的有恶心呕吐、流涎、瘙痒、腹泻及其他肠道疾病，自然对水生生物有一定的危害;大多 数的无机氰化物都属于高毒、剧毒物质，极少量的氰化物就会使人畜在段时间里中毒死亡，未 达标的含氟、氰废水排放入自然环境中，通过地表径流、渗透等方式进入地表水和地下水中， 使得生态系统被破坏，甚至严重威胁到水生动植物的生存;目前常用的污水处理装置和处理方 法，去污效果不是太理想，特别是复合肥厂污水，因为污水情况复杂，去污效果更差，而且成 本高。
发明内容
本发明针对复合肥厂污水特点，提出了一种处理复合肥污水的高效微生物菌剂制备方法及 使用方法，本发明的微生物菌剂对复合肥污水具有非常好的去污效果，而且微生物会随着污染 物的减少而逐渐消失，也不会对环境造成危害，本发明的复合微生物菌剂成本低，具有广泛的 应用前景。
为了达到上述目的，本发明采用的技术方案是：1、处理复合肥污水的高效微生物菌剂制 备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤A、各菌种的活化：
将硝化细菌、亚硝化细菌以及聚磷菌在各自固体培养基上进行活化;
步骤B、三角瓶扩大培养：
分别制备各菌种液体培养基装入250mL三角瓶中，装入液体培养基100mL，将固体培养 基上长出的菌落接种进独立三角瓶中，摇床培养，培养菌体数量达到1.0×108-6.0×108个/mL; 步骤C、发酵罐混合扩大培养：
将混合培养基3.5-4L加入发酵罐中，分别接种硝化细菌、亚硝化细菌以及聚磷菌进发酵 罐中进行培养，培养混合菌种菌体数量达到1.0×108-2.0×108个/mL;
步骤D、离心、收集沉淀、干燥得到混合菌粉：
将步骤C中得到的混合菌种培养液经过离心收集沉淀，再将沉淀干燥，得到混合菌粉; 步骤E、复合微生物菌剂的制备：
将步骤D得到的混合菌粉与沸石、Ca(OH)2、无水亚硫酸钠、葡萄糖、硫酸铜混合制 成复合微生物菌剂。
步骤E中，以质量份数计，其中混合菌粉50-60份、沸石30-50份、Ca(OH)21-2份、 无水亚硫酸钠0.5-1份、葡萄糖0.5-1份和硫酸铜0.01-0.02份;其中沸石粉碎，过80-120目筛。
所述硝化细菌为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)CGMCC No.150和氨氧化假诺 卡氏菌(Pseudonocardia ammonioxydans)CGMCC No.41877的一种或两种;
所述亚硝化细菌为氨氧化细菌(Ammonia oxidizing bacteria)CGMCC No.4287;
所述聚磷菌为产气肠杆菌(Enterbacter aerogenes)CGMCC No.16753、脱氮副球菌 (Paracoccus denitrificans)CGMCC No.15358、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtillus)CGMCC No. 17408和氧化亚铁硫酸杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)CGMCC No.15066中的一种或多 种。
上述菌种均可以从中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)购买得到。
所述氨氧化假诺卡氏细菌液体培养基组分为：葡萄糖10g，酵母浸粉10g，蒸馏水1L;
所述氨氧化细菌液体培养基组分为：(NH4)2SO40.5g，NaCl 2g，FeSO4・7H2O 0.4g，K2HPO4 1g，MgSO4・7H2O 0.5g，NaCO35g，蒸馏水1L，调节pH值为7.2;
所述枯草芽孢杆菌液体培养基组分为：葡萄糖5g，蛋白胨5g，NaCl 3g，牛肉膏0.5g， 蒸馏水1L;
所述产气肠杆菌液体培养基组分为：(NH4)2SO41g，NaCl 0.1g，葡萄糖5g，Na2HPO42g， MgSO4・7H2O 0.5g，酵母浸粉0.5g，NaCO31g，蒸馏水1L，调节pH值为7.0;
上述各菌种的固体培养基为分别在其液体培养基中加入15-20g琼脂粉，并在121℃灭菌 30min。
所述混合培养基组分为：葡萄糖10g，酵母浸粉10g，NaCl1g，(NH4)2SO41g，K2HPO41g， MgSO4・7H2O0.5g，FeSO4・7H2O3g，NaCO32g，蒸馏水1L，调节pH值为7.0。
步骤B中，接入三角瓶中的菌落为单菌落，摇床转速为150r/min。
步骤C中，分别接种硝化细菌、亚硝化细菌以及聚磷菌量为发酵罐容积的5-10%。
步骤D中，离心速率为4000r/min，干燥温度为30-40℃。
步骤A、步骤B和步骤C中，培养时间为72-96h，培养温度均为28-30℃。
处理复合肥污水的高效微生物菌剂使用方法，首先，用Ca(OH)2调节污水pH为7.0-8.0， 然后，在每20m3污水中投入该复合微生物菌剂0.5-1Kg，处理污水时，缓慢向污水中通入空气。
与现有技术相比，本发明至少具有以下有益效果：本发明利用三角瓶分别扩大培养，可达 到各个菌种的最高生长需要，发酵罐扩大培养节约资源，各菌种达到要求浓度，且容易培养， 复合微生物菌剂中的葡萄糖可以促进菌种的生长，能维持一定的消化速率，该复合微生物菌剂 成本低廉，复合微生物菌剂中沸石、Ca(OH)2、无水亚硫酸钠、硫酸铜等的可有效地去除污 水中的氟、氰等离子，复合微生物可迅速降低氨氮和磷等，减小水体富营养化，使处理后的水 质达到国家排放标准，具有广泛的应用前景，本发明对污水中氨氮的去除率达到98%，磷的去 除率为96.5%，氟的去除率达到99%，氰的去除率达到97.9%。
本发明的复合微生物不含病原体和致病菌，利用污水中的有机物满足自身营养需求，能够 有效的降解污水污染物，当污水得到净化后，这些微生物会随着污染物的减少而逐渐消失，也 不会对环境造成危害。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步地说明，所述是对本发明的解释而不是限制，任 何扩大培养使菌体浓度达到要求的培养方式均可。
本发明涉及的硝化细菌为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)CGMCC No.150和氨 氧化假诺卡氏菌(Pseudonocardia ammonioxydans)CGMCC No.41877的一种或两种;
亚硝化细菌为氨氧化细菌(Ammonia oxidizing bacteria)CGMCC No.4287;
聚磷菌为产气肠杆菌(Enterbacter aerogenes)CGMCC No.16753、脱氮副球菌(Paracoccus denitrificans)CGMCC No.15358、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtillus)CGMCC No.17408和氧 化亚铁硫酸杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)CGMCC No.15066中的一种或多种。
上述菌种均可以从中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)购买得到。
本发明的实施例中，各菌种的液体培养基组分如下：
氨氧化假诺卡氏细菌培养基：葡萄糖10g，酵母浸粉10g，蒸馏水1L;
氨氧化细菌培养基：(NH4)2SO40.5g，NaCl 2g，FeSO4・7H2O 0.4g，K2HPO41g，MgSO4・7H2O 0.5g，NaCO35g，蒸馏水1L，调节pH值为7.2;
枯草芽孢杆菌培养基：葡萄糖5g，蛋白胨5g，NaCl 3g，牛肉膏0.5g，蒸馏水1L;
产气肠杆菌培养基(NH4)2SO41g，NaCl 0.1g，葡萄糖5g，Na2HPO42g，MgSO4・7H2O 0.5g， 酵母浸粉0.5g，NaCO31g，蒸馏水1L，调节pH值为7.0;
上述各菌种的固体培养基为分别在其液体培养基中加入15-20g琼脂粉，并在121℃灭菌 30min。
本发明所使用的混合培养基组分为：葡萄糖10g，酵母浸粉10g，NaCl1g，(NH4)2SO41g， K2HPO41g，MgSO4・7H2O0.5g，FeSO4・7H2O3g，NaCO32g，蒸馏水1L，调节pH值为7.0。
实施例1
步骤A各菌种的活化
采用不同培养基培养，将氨氧化假诺卡氏菌、氨氧化细菌和产气肠杆菌的菌种接种于固体 培养基上28-30℃培养72-96h。
步骤B三角瓶扩大培养
分别制备步骤A中各菌种的液体培养基装入250mL三角瓶中，装入液体培养基100mL， 将固体培养基上长出的适宜大小的单菌落接种进独立三角瓶中，摇床150r/min、30℃培养96h 使菌体含量达到1.0×108-6.0×108个/mL;
步骤C发酵罐混合扩大培养
将混合培养基4L加入发酵罐中，分别接种氨氧化假诺卡氏菌、氨氧化细菌和产气肠杆菌 为混合培养基体积的5%，8%，10%，30℃培养72h使混合菌种菌体含量达到1.0×108-2.0× 108个/mL;
步骤D复合微生物、收集沉淀、干燥得到混合菌粉
将步骤C中得到的混合菌种培养液经过4000r/min离心收集沉淀，再将沉淀在30℃干燥， 得到混合菌粉;
步骤E复合微生物菌剂的制备
将步骤D得到的混合菌粉与沸石、Ca(OH)2、无水亚硫酸钠、葡萄糖混合制成复合微 生物菌剂，以质量份数计，其中混合菌粉50份、沸石40份、Ca(OH)21份、无水亚硫酸钠 0.5份、葡萄糖0.5-1份、硫酸铜0.01-0.02份;其中沸石粉碎，过80-120目筛。
步骤F复合微生物菌剂的使用
首先，用Ca(OH)2调节污水pH为7.0-8.0，然后向每20m3污水中投入该复合微生物菌 剂0.5-1Kg，缓慢向污水中通入空气。
实施例2
步骤A各菌种的活化
采用不同培养基培养，将铜绿假单胞菌、氨氧化细菌和脱氮副球菌的菌种接种于固体培养 基上28-30℃培养72-96h。
步骤B三角瓶扩大培养
分别制备步骤A中各菌种的液体培养基装入250mL三角瓶中，装入液体培养基100mL， 将固体培养基上长出的适宜大小的单菌落接种进独立三角瓶中，摇床150r/min、30℃培养 72-96h使菌体含量达到1.0×108-2.0×108个/mL;
步骤C发酵罐混合扩大培养
将混合培养基4L加入发酵罐中，分别接种铜绿假单胞菌、氨氧化细菌和脱氮副球菌为混 合培养基体积的10%，10%，5%，30℃培养72h使混合菌种菌体含量达到1.0×108-2.0×108个/mL;
步骤D复合微生物、收集沉淀、干燥得到混合菌粉
将步骤C中得到的混合菌种培养液经过4000r/min离心收集沉淀，再将沉淀在30℃干燥， 得到混合菌粉;
E复合微生物菌剂的制备
将步骤D得到的混合菌粉与沸石、Ca(OH)2、无水亚硫酸钠、葡萄糖混合制成复合微 生物菌剂，以质量计，其中混合菌粉55份、沸石40份、Ca(OH)21.5份、无水亚硫酸钠0.5 份、葡萄糖0.5份、硫酸铜0.02份。其中沸石粉碎，过80-120目筛。
F复合微生物菌剂的使用
首先，用Ca(OH)2调节污水pH为7.0-8.0，然后向每20m3污水中投入该复合微生物菌 剂0.5-1Kg，缓慢向污水中通入空气。
实施例3
步骤A各菌种的活化
采用不同培养基培养，将铜绿假单胞菌、氨氧化假诺卡氏菌、氨氧化细菌和枯草芽孢杆菌 的菌种接种于固体培养基上28-30℃培养72-96h。
步骤B三角瓶扩大培养
分别制备步骤A中各菌种的液体培养基装入250mL三角瓶中，装入液体培养基100mL， 将固体培养基上长出的适宜大小的单菌落接种进独立三角瓶中，摇床150r/min、30℃培养96h 使菌体含量达到5.0×108-6.0×108个/mL;
步骤C发酵罐混合扩大培养
将混合培养基4L加入发酵罐中，分别接种铜绿假单胞菌、氨氧化假诺卡氏菌、氨氧化细 菌和枯草芽孢杆菌为混合培养基体积的3%，5%，5%，8%，30℃培养72h使混合菌种菌体含 量达到1.0×108-2.0×108个/mL;
步骤D复合微生物、收集沉淀、干燥得到混合菌粉
将步骤C中得到的混合菌种培养液经过4000r/min离心收集沉淀，再将沉淀在30℃干燥， 得到混合菌粉;
步骤E复合微生物菌剂的制备
将步骤D得到的混合菌粉与沸石、Ca(OH)2、无水亚硫酸钠、葡萄糖混合制成复合微 生物菌剂，以质量计，其中混合菌粉55份、沸石35份、Ca(OH)21份、无水亚硫酸钠1份、 葡萄糖0.5份、硫酸铜0.02份。其中沸石粉碎，过80-120目筛。
步骤F复合微生物菌剂的使用
首先，用Ca(OH)2调节污水pH为7.0-8.0，然后向每20m3污水中投入该复合微生物菌 剂0.5-1Kg，缓慢向污水中通入空气。
实施例4
步骤A各菌种的活化
采用不同培养基培养，将铜绿假单胞菌、氨氧化假诺卡氏菌、氨氧化细菌和氧化亚铁硫酸 杆菌的菌种接种于固体培养基上28-30℃培养96h。
步骤B三角瓶扩大培养
分别制备步骤A中各菌种的液体培养基装入250mL三角瓶中，装入液体培养基100mL， 将固体培养基上长出的适宜大小的单菌落接种进独立三角瓶中，摇床150r/min、30℃培养96h 使菌体含量达到3.0×108-4.0×108个/mL;
步骤C发酵罐混合扩大培养
将混合培养基4L加入发酵罐中，分别接种铜绿假单胞菌、氨氧化假诺卡氏菌、氨氧化细 菌和氧化亚铁硫酸杆菌为混合培养基体积的6%，2%，6%，5%，30℃培养72h使混合菌种菌 体含量达到1.0×108-2.0×108个/mL;
步骤D复合微生物、收集沉淀、干燥得到混合菌粉
将步骤C中得到的混合菌种培养液经过4000r/min离心收集沉淀，再将沉淀在30℃干燥， 得到混合菌粉;
步骤E复合微生物菌剂的制备
将步骤D得到的混合菌粉与沸石、Ca(OH)2、无水亚硫酸钠、葡萄糖混合制成复合微 生物菌剂，以质量计，其中混合菌粉50份、沸石45份、Ca(OH)21份、无水亚硫酸钠1份、 葡萄糖1份、硫酸铜0.01份。其中沸石粉碎，过80-120目筛。
步骤F复合微生物菌剂的使用
首先，用Ca(OH)2调节污水pH为7.0-8.0，然后向每20m3污水中投入该复合微生物菌 剂0.5-1Kg，缓慢向污水中通入空气。
实施例5
步骤A各菌种的活化
采用不同培养基培养，将铜绿假单胞菌、氨氧化细菌、脱氮副球菌和枯草芽孢杆菌的菌种 接种于固体培养基上28-30℃培养72h。
步骤B三角瓶扩大培养
分别制备步骤A中各菌种的液体培养基装入250mL三角瓶中，装入液体培养基100mL， 将固体培养基上长出的适宜大小的单菌落接种进独立三角瓶中，摇床150r/min、30℃培养96h 使菌体含量达到1.0×108-6.0×108个/mL;
步骤C发酵罐混合扩大培养
将混合培养基4L加入发酵罐中，分别接种铜绿假单胞菌、氨氧化细菌、脱氮副球菌和枯 草芽孢杆菌为混合培养基体积的5%，7%，5%，5%，30℃培养72h使混合菌种菌体含量达到 1.0×108-2.0×108个/mL;
步骤D复合微生物、收集沉淀、干燥得到混合菌粉
将步骤C中得到的混合菌种培养液经过4000r/min离心收集沉淀，再将沉淀在30℃干燥， 得到混合菌粉;
步骤E复合微生物菌剂的制备
将步骤D得到的混合菌粉与沸石、Ca(OH)2、无水亚硫酸钠、葡萄糖混合制成复合微 生物菌剂，以质量计，其中混合菌粉60份、沸石35份、Ca(OH)22份、无水亚硫酸钠1份、 葡萄糖1份、硫酸铜0.01份。其中沸石粉碎，过80-120目筛。
步骤F复合微生物菌剂的使用
首先，用Ca(OH)2调节污水pH为7.0-8.0，然后向每20m3污水中投入该复合微生物菌 剂0.5-1Kg，缓慢向污水中通入空气。
实施例6
步骤A各菌种的活化
采用不同培养基培养，将氨氧化假诺卡氏菌、氨氧化细菌、产气肠杆菌、脱氮副球菌、枯 草芽孢杆菌和氧化亚铁硫酸杆菌的菌种接种于固体培养基上28-30℃培养72-96h。
步骤B三角瓶扩大培养
分别制备步骤A中各菌种的液体培养基装入250mL三角瓶中，装入液体培养基100mL， 将固体培养基上长出的适宜大小的单菌落接种进独立三角瓶中，摇床150r/min、30℃培养96h 使菌体含量达到1.0×108-6.0×108个/mL;
步骤C发酵罐混合扩大培养
将混合培养基4L加入发酵罐中，分别接种氨氧化假诺卡氏菌、氨氧化细菌、产气肠杆菌、 脱氮副球菌、枯草芽孢杆菌和氧化亚铁硫酸杆菌为混合培养基体积的10%，9%，2%，3%，2%， 2%，30℃培养72h使混合菌种菌体含量达到1.0×108-2.0×108个/mL;
步骤D复合微生物、收集沉淀、干燥得到混合菌粉
将步骤C中得到的混合菌种培养液经过4000r/min离心收集沉淀，再将沉淀在30℃干燥， 得到混合菌粉;
步骤E复合微生物菌剂的制备
将步骤D得到的混合菌粉与沸石、Ca(OH)2、无水亚硫酸钠、葡萄糖混合制成复合微 生物菌剂，以质量计，其中混合菌粉60份、沸石30份、Ca(OH)21.5份、无水亚硫酸钠0.5 份、葡萄糖1份、硫酸铜0.01份。其中沸石粉碎，过80-120目筛。
步骤F复合微生物菌剂的使用
首先，用Ca(OH)2调节污水pH为7.0-8.0，然后向每20m3污水中投入该复合微生物菌 剂0.5-1Kg，缓慢向污水中通入空气。
实施例7
步骤A各菌种的活化
采用不同培养基培养，将铜绿假单胞菌、氨氧化假诺卡氏菌、氨氧化细菌、产气肠杆菌、 枯草芽孢杆菌和氧化亚铁硫酸杆菌的菌种接种于固体培养基上28-30℃培养84h。
步骤B三角瓶扩大培养
分别制备步骤A中各菌种的液体培养基装入250mL三角瓶中，装入液体培养基100mL， 将固体培养基上长出的适宜大小的单菌落接种进独立三角瓶中，摇床150r/min、30℃培养96h 使菌体含量达到1.0×108-6.0×108个/mL;
步骤C发酵罐混合扩大培养
将混合培养基4L加入发酵罐中，分别接种铜绿假单胞菌、氨氧化假诺卡氏菌、氨氧化细 菌、产气肠杆菌、枯草芽孢杆菌和氧化亚铁硫酸杆菌为混合培养基体积的6%，1%，10%，3%， 3%，1%，30℃培养72h使混合菌种菌体含量达到1.0×108-2.0×108个/mL;
步骤D复合微生物、收集沉淀、干燥得到混合菌粉
将步骤C中得到的混合菌种培养液经过4000r/min离心收集沉淀，再将沉淀在30℃干燥， 得到混合菌粉;
步骤E复合微生物菌剂的制备
将步骤D得到的混合菌粉与沸石、Ca(OH)2、无水亚硫酸钠、葡萄糖混合制成复合微 生物菌剂，以质量计，其中混合菌粉55份、沸石40份、Ca(OH)21份、无水亚硫酸钠0.5 份、葡萄糖0.5份、硫酸铜0.01份。其中沸石粉碎，过80-120目筛。
步骤F复合微生物菌剂的使用
首先，用Ca(OH)2调节污水pH为7.0-8.0，然后向每20m3污水中投入该复合微生物菌 剂0.5-1Kg，缓慢向污水中通入空气。
本发明的复合微生物不含病原体和致病菌，利用污水中的有机物满足自身营养需求，能够 有效的降解污水污染物，当污水得到净化后，这些微生物会随着污染物的减少而逐渐消失，也 不会对环境造成危害，对污水中氨氮的去除率达到98%，磷的去除率为96.5%，氟的去除率达 到99%，氰的去除率达到97.9%，达到排放标准。