一种具有防病功能的微生物菌剂及其制备方法与流程
本发明涉及微生物菌剂领域，陪护老人13825404095尤其涉及一种具有防病功能的微生物菌剂及其制备方法。
背景技术：
：农用微生物菌剂是指目标微生物或有效菌经过工业化扩繁后加工制成的活菌制剂，可用于拌种、灌根，具有改良土壤、恢复地力、维持根际微生物菌平衡以及降解有毒害物质等作用，因此广泛应用于农作物的种植和土壤的改良。农用微生物菌剂按剂型分为液体、粉剂、颗粒，液体和粉剂在生产和施用过程中存在贮存难、不能有效作用于作物根际的问题，无形增加了其应用成本。技术实现要素：本发明的目的在于针对现有技术的不足而提供一种具有防病功能的微生物菌剂及其制备方法，根据土壤微生态学和植物营养生理学原理，选用防治烟草青枯病和黑胫病的高效微生物菌株，采用现代微生物工程技术精制而成的微生物菌剂。本品通过调节土壤、根际和根内微生物的组成和结构，提高有益微生物的数量，有效抑制病原菌以及有害菌，解决因烤烟重茬引起土传病害加重以及烤烟产量和品质下降的问题，从而达到使烟草根系发达、生长旺盛、抗逆性强、品质改善的目的。为达到上述目的，本发明通过以下技术方案来实现。一种具有防病功能的微生物菌剂，它包括以下重量份的原料：蛋白粉20-50份，钙镁磷肥20-50份，磷酸氢钙50-100份，甘露醇3-5份，七水硫酸亚铁1-3份，七水硫酸镁1-3份，油菜枯饼有机肥700-800份，复合功能菌孢子液5-10份；复合功能菌孢子液中的功能菌包括解淀粉芽孢杆菌，保藏登记号：cgmccno.18262，贝莱斯芽孢杆菌，保藏登记号：cgmccno.18272，解淀粉芽孢杆菌与贝莱斯芽孢杆菌孢子液的体积比为1-5：1-5。制备方法为：步骤一，孢子液的制备，取解淀粉芽孢杆菌、贝莱斯芽孢杆菌菌株在无菌条件下分别接种于液体发酵培养基中，于25-37℃条件下培养24-36h，然后按10-20％体积比再次接种于液体发酵培养基中，于25-37℃条件下扩大培养24-36h，将功能菌株发酵液分别离心取下层孢子液，备用；步骤二，复合功能菌孢子液的制备，取步骤一中制得解淀粉芽孢杆菌、贝莱斯芽孢杆菌孢子液按1-5：1-5的体积比混匀后，制得复合功能菌孢子液，备用；步骤三，物料准备，分别取蛋白粉、甘露醇、复合功能菌孢子液20-50份、3-5份、5-10份，混匀备用；步骤四，物料准备，取磷酸氢钙50-100份、钙镁磷肥20-50份，七水硫酸亚铁1-3份、七水硫酸镁1-3份、油菜枯饼有机肥700-800份比例投入混匀机，混匀备用；步骤五，造粒，将糖蜜加水配置成50％浓度的溶液，取糖蜜溶液与步骤三、四的制备的物料按重量比15:100，经圆盘造粒机，造粒；步骤六，将步骤五造粒经过真空抽滤、干燥后经筛分得到成品。进一步的，所述步骤一中制备的孢子液中芽孢量95％以上,有效活菌数≥500亿cfu/ml。进一步的，所述步骤一中液体发酵培养基的组分为：蛋白胨10g/l，酵母提取物5g/l，氯化钠10g/l。进一步的，所述油菜枯饼有机肥的制备方法为：将油菜枯饼用破碎机破碎成1-5mm的碎料，将油菜枯饼碎料、发酵腐熟剂、水按照60％、0.5％、39.5％的重量比进行混合并搅拌均匀后进行槽式发酵，发酵过程中温度不高于50℃，发酵周期为15天，发酵腐熟后，再进行为期10天的熟化过程，将熟化完成后的油菜枯饼用粉碎机粉碎，过40目筛，即为完全腐熟油菜枯饼有机肥。本发明优点：1、功能菌株施入土壤后能快速定殖于土壤及根际周围，形成优势菌，对病原菌的活动起到抑制作用。2、本发明的功能微生物可有效利用糖蜜中的糖类等碳水化合物，可有效将甘蔗制糖后副产物有效利用，同时其粘性有利于造粒成球率的提高，节约生产成本。3、蛋白粉、甘露醇等物质对于保持微生物活性，延长货架期均具有积极作用。4、采用现代微生物工程技术精制而成的微生物菌剂，通过调节土壤、根际和根内微生物的组成和结构，提高有益微生物的数量，有效抑制病原菌以及有害菌，解决因烤烟重茬引起土传病害加重以及烤烟产量和品质下降的问题，从而达到使烟草根系发达、生长旺盛、抗逆性强、品质改善的目的。具体实施方式下面结合实施例对本发明做进一步说明，但不局限于说明书上的内容。一种具有防病功能的微生物菌剂，它包括以下重量份的原料：蛋白粉20-50份，钙镁磷肥20-50份，磷酸氢钙50-100份，甘露醇3-5份，七水硫酸亚铁1-3份，七水硫酸镁1-3份，油菜枯饼有机肥700-800份，复合功能菌孢子液5-10份。油菜枯饼有机肥为腐熟后粉碎过40目筛。复合功能菌孢子液中的功能菌包括解淀粉芽孢杆菌(bacillusamyloliquefaciens)，保藏登记号：cgmccno.18262，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2019年7月22日。贝莱斯芽孢杆菌(bacillusvelezensis)，保藏登记号：cgmccno.18272，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2019年7月22日。其制备方法：(1)孢子液的制备，取解淀粉芽孢杆菌、贝莱斯芽孢杆菌菌株在无菌条件下分别接种于液体发酵培养基中，于25-37℃条件下培养24-36h，然后按10-20％体积比(菌种与发酵液)再次接种于新的液体发酵培养基中，于25-37℃条件下扩大培养24-36h，然后功能菌株发酵液分别离心取下层孢子液，备用；(2)复合功能菌孢子液的制备，将步骤(1)中制得的孢子液，芽孢量95％以上,有效活菌数≥500亿cfu/ml，解淀粉芽孢杆菌、贝莱斯芽孢杆菌孢子液按1-5：1-5的体积比混匀后，制得复合功能菌孢子液；(3)物料准备，分别取蛋白粉、甘露醇、复合功能菌孢子液20-50份、3-5份、5-10份，混匀备用。(4)取磷酸氢钙50-100份、钙镁磷肥20-50份，七水硫酸亚铁1-3份、七水硫酸镁1-3份、油菜枯饼有机肥700-800份比例投入混匀机，混匀备用。(5)造粒，将糖蜜加水配置成50％浓度(质量)的溶液备用，将50％浓度糖蜜溶液按15％重量比与步骤(3)、(4)的制备的物料经圆盘造粒机，造粒。造粒过程中控制水分含量始终维持在20％-25％之间，圆盘转速控制在10-12r/min。(6)将步骤(5)造粒,然后抽滤达到真空干燥后，经筛分得到成品。抽滤温度设置为37℃，以保证菌种的存活率，关闭放气阀，开启真空阀20min,过5-8目筛即可。上述液体发酵培养基的组分为：蛋白胨10g/l，酵母提取物5g/l，氯化钠10g/l。油菜枯饼有机肥的制备方法为：将油菜枯饼用破碎机破碎成1-5mm的碎料，将油菜枯饼碎料、发酵腐熟剂、水按照60％、0.5％、39.5％的重量比进行混合并搅拌均匀后进行槽式发酵，开启曝气装置(每立方米物料0.1m3/min)、升温后每隔2天翻抛一次，维持发酵过程中氧气含量在15％-20％之间、温度不高于50℃，发酵周期为15天，完全发酵腐熟后，再进行为期10天左右的熟化过程，将熟化完成后的油菜枯饼用粉碎机粉碎，过40目筛，即为完全腐熟油菜枯饼有机肥。具体实施例1一种具有防病功能的微生物菌剂，它包括以下重量份的原料：蛋白粉20份，钙镁磷肥50份，磷酸氢钙50份，甘露醇3份，七水硫酸亚铁3份、七水硫酸镁1份，油菜枯饼有机肥700份，复合功能菌孢子液5份。具体实施例1一种具有防病功能的微生物菌剂，它包括以下重量份的原料：蛋白粉20份，钙镁磷肥20份，磷酸氢钙50份，甘露醇3份，七水硫酸亚铁1份、七水硫酸镁1份，油菜枯饼有机肥700份，复合功能菌孢子液5份。具体实施例2一种具有防病功能的微生物菌剂，它包括以下重量份的原料：蛋白粉50份，钙镁磷肥50份，磷酸氢钙100份，甘露醇5份，七水硫酸亚铁3份、七水硫酸镁3份，油菜枯饼有机肥800份，复合功能菌孢子液10份。具体实施例3一种具有防病功能的微生物菌剂，它包括以下重量份的原料：蛋白粉35份，钙镁磷肥35份，磷酸氢钙75份，甘露醇4份，七水硫酸亚铁2份、七水硫酸镁2份，油菜枯饼有机肥750份，复合功能菌孢子液8份。具体实施例4一种具有防病功能的微生物菌剂，它包括以下重量份的原料：蛋白粉20份，钙镁磷肥25份，磷酸氢钙100份，甘露醇5份，七水硫酸亚铁3份、七水硫酸镁1份，完全腐熟粉碎过40目筛的油菜枯饼有机肥750份，复合功能菌孢子液5份。具体实施例5一种具有防病功能的微生物菌剂，它包括以下重量份的原料：蛋白粉50份，钙镁磷肥40份，磷酸氢钙60份，甘露醇3份，七水硫酸亚铁1份、七水硫酸镁3份，完全腐熟粉碎过40目筛的油菜枯饼有机肥800份，复合功能菌孢子液10份。具体实施例6一种具有防病功能的微生物菌剂，它包括以下重量份的原料：蛋白粉40份，钙镁磷肥50份，磷酸氢钙80份，甘露醇4份，七水硫酸亚铁3份、七水硫酸镁3份，完全腐熟粉碎过40目筛的油菜枯饼有机肥800份，复合功能菌孢子液5份。以下为具体应用效果试验1.2不同配比防病微生物菌剂对烟草青枯病的温室防效1.2.1试验地点云南省微生物发酵工程研究中心有限公司温室大棚。1.2.2试验作物云烟87。1.2.3试验设计将烟草种子置于塑料穴盘育苗后，将生长一致的三叶期烟草幼苗移栽至大棚内，待烟草进入旺长期时进行处理，揭膜后生防菌剂每株环施23g(25kg/亩)菌剂后覆土，对照组浇灌等体积清水。试验处理分别为实施例1-6生防菌剂，实施例1-6号对应处理1-6，每个处理组25株烟草苗，每个处理3次重复。供试菌剂处理7d后浇灌青枯病病原菌，每株30ml，使其细菌密度维持在3.0-5.0*107cuf/ml。病原菌处理后每天观察其生长状况和发病情况，30d后统计最终结果。1.2.4不同配比生防菌剂对烟草青枯病的温室防效由表1可知，选择不同处理菌剂作为生防潜力菌株进行烟草青枯病温室防效试验，接种病原菌8天后，对照组烟株开始发病，植株底部叶片出现萎蔫现象，而试验组各处理的感病时间则相对有所推迟，病原菌接种后30天，对各处理的感病程度进行了统计分析，各生防菌处理对烟草青枯病均具有一定的防治效果，其中菌剂3的防治效果最优达到76.22％，菌剂5的防治效果最差，防效为73.90％。表16株供试菌对烟草青枯病的温室防治效果注：不同字母表示在a＝0.05显著下的差异1.3供试菌株对烟草黑胫病的温室防效1.3.1试验地点云南省微生物发酵工程研究中心有限公司大棚外露天试验地。1.3.2试验作物云烟87。1.3.3试验设计选取露天试验地烟草黑胫病连续发病的地块，设置8个处理，6种配比不同的生防菌剂作为处理，以药剂58％甲霜灵锰锌(每袋兑水100kg)灌根为阳性对照，未进行任何药剂处理的为空白对照，试验处理分别为实施例1-6生防菌剂，实施例1-6号对应处理1-6，3次重复，每小区种30株烟，所有处理随机区组排列。药剂处理浓度及用量参考药剂说明，烟苗进入旺长期时施用2次；揭膜后施用并覆土，田间栽培管理方法与当地一致，不施用其他杀菌剂，烟草进入旺长期30天后进行防效统计与分析。1.3.4不同配比生防菌剂对烟草黑胫病的田间防效由表2可知，利用6种不同配比生防菌剂进行烟草黑胫病小区试验，各生防菌剂均具有一定的防治效果，其中菌剂3的防治效果最优，达69.74％，其次为菌剂2、菌剂1、菌剂4、菌剂6、菌剂5，虽防效不如化学药剂，但作为生防试剂防效已非常理想。表2不同生防菌剂对烟草黑胫病的田间防效处理发病率％病情指数防治效果％111.33e3.40e65.43±0.15b29.66f4.86b65.70±1.45g316.33c4.86b69.74±0.39e414.0d4.46c62.73±0.40c516.33c4.73bc61.03±0.21d611.0e3.86d62.26±0.21c58％甲霜灵锰锌2.33g1.00f88.74±0.84ack23.66a6.73a-注：不同字母表示在a＝0.05显著下的差异综合以上结果可知：利用该2株功能菌制备的的生防菌剂对烟草青枯病和黑胫病具有良好的防效，相较于同种功能的化学药剂而言，防治效果已非常理想，可广泛应用于烟草病害的生物防治领域。显然，本发明的上述实施方式仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。当前第1页12